透射電子顯微鏡(transmission electron microscope, TEM)是利用透射電子成像,因而要求樣品薄(加速電壓100kV時,樣品厚度不能超過100nm)。其結構包括三大部分:電子學系統、真空系統和電子光學系統。電子光學系統提供電子束,在高真空條件下照射到樣品上,經過成像系統中的物鏡成像,再經過中間鏡和投影鏡的進一步放大,獲得的圖像記錄在CCD上。TEM使用油擴散泵(Diffuse Pump)來實現高真空。由于油擴散泵的啟動和關閉都需要30分鐘,導致TEM開機和關機都至少需要30分鐘。TEM發射出的高能電子束轟擊到光路元器件上以及樣品上,會產生以X-ray為主的等等其他射線輻射,因此建議孕婦等過敏性體質者盡量避免接觸TEM。
由于平臺現有TEM的加速電壓為100kV,是一臺生物電鏡,因此無法滿足材料科學上要求的高放大倍數(30萬倍以上)、高分辨、衍射花樣等實驗要求,有這方面需求的科研人員請與武大、地大等單位聯系。
TEM是研究結構生物學的有力工具。除了電鏡之外,現在尚沒有一種儀器能使人們用肉眼直接觀察到亞細胞結構、蛋白大分子(直徑20nm以上)的排列結構形態。利用電鏡觀察超微結構的形態和位置,可以研究解o部分形態和功能的問題。
TEM是研究超微結構的工具之一,但它存在一些缺點:(1)TEM的價格昂貴,維護費用及其配件、耗材都在幾百甚至上千美元以上。(2)TEM的維護和使用均要求較高的技術,也是一個精細、繁瑣的過程。TEM每3天要做一次維護和電子光路調整,每次調整和維護至少需要2個小時。(3)TEM不能像光鏡那樣隨時可用,受到很多限制。TEM放大倍數有很多,再加上切片的限制,因此無法實現始終同一放大倍數的拍攝。(4)TEM樣品置于真空中,因此對活體標本的觀察是不可能的。(5)TEM樣品取材及制備存在局限性。TEM取材要求只有1mm3大小塊狀,而且觀察面更小,如果把一個厚6μm的細胞核切成60nm的超薄切片,可以且100張,而一般光鏡的石蠟切片厚度即為6μm。如果要得到一張光鏡樣品切片的信息,就不得不記錄下100張超薄切片的信息,工作量就要增加了100倍。(6)TEM的觀察視野較小,只有6μm×9μm,當放大10 000倍時,要想記錄1 mm2的標本信息,就需要拍攝18 500張照片。因此在進行電鏡觀察研究時,必要有選擇性、有代表性地嚴格選擇樣品。
使用TEM前,首先要樹立一個概念:TEM不是光鏡的再放大,TEM的研究對象不是組織,而是細胞器,是以細胞為整體研究細胞內部結構的工具。組織切片能解決問題的沒有做TEM的必要!